1. Вуглеводи та ліпіди: властивості та кількісне визначення

Скачати 0.53 Mb.

Назва	1. Вуглеводи та ліпіди: властивості та кількісне визначення
Сторінка	7/7
Дата	05.04.2013
Розмір	0.53 Mb.
Тип	Документи

bibl.com.ua > Фізика > Документи

1 2 3 4 5 6 7

Розрахунок активності. За різницею титрувань досліду і контролю в мл 0,1 н. гідроксиду натрію, яку перераховують на 10 мл фільтрату, знаходять одиниці активності за табл. 5.3. У табл. 4.3 наведені також значення протеолітичної активності за умов, що на аналіз було взято 10 мл ферментного розчину в розбавленні 1:100 чи 1:50.

Для інших кількостей ферментного розчину чи інших розведень протеолітичну активність перераховують за формулою:

де е – кількість одиниць, знайдена по таблиці згідно з результатами титрування; а – наважка препарату (г, мл), яка відповідає 10 мл фільтрату (1) 5 всієї кількості, взятої на аналіз).

Приклад розрахунку.

1. Для аналізу брали 10 мл ферментного екстракту 1:50. На титрування досліду витратили 4,2 мл 0,1 н. розчину гідроксиду натрію, на титрування контролю – 2.0 мл. Різниця титрувань перерахована на 10 мл фільтрату (4,2 – 2,0) : 2 =1,1мл 0,1 н. розчину гідроксиду натрію. Величина 1,1 відповідає за таблицею 5.3 ПА = 1,868.

2. Для аналізу брали 5 мл розчину очищеного препарату 1:1000., Різниця титрувань досліду і контролю дорівнює 1,8 мл 0,1 н. розчину гідроксиду натрію. Величина 1,8 дорівнює за таблицею 0,1353 од., визначаємо "ПА".

В 5 мл розчину 1:1000 міститься 0.005 г ферменту. Ці 0,005 г містяться в 50 мл реакційної суміші, а в 10 мл ферменту – 0,001 г

Одержані величини активності округлюють: для культур і сиропів – до 0,01, а для очищених препаратів – до 0,1.

Реактиви: 1. 5%-й лужний розчин казеїну: 50 г (за сухою речовиною) технічного подрібненого казеїну вносять в склянку, додають для набрякання 50 мл дистильованої води та залишають на 30 хв., потім склянку поміщають на водяну, баню з температурою 65–70°С. Поступово, при ретельному помішуванні скляною паличкою, додають 50 мл 1 н. розчину гідроксиду натрію. В процесі розчинення казеїну додають невеликими порціями воду (5–6 разів по 50–80 мл), нагріту до 65–70°С, та витримують на бані до повного зникнення згустків. Після повного розчинення казеїну та охолодження об'єм розчину доводять в мірній колбі до 1 л фільтрують через чотири шари марлі; 2. 0,1 н. розчин соляної кислоти в 7,5%-му розчині сульфату натрію; 3. 0,1 н. розчин гідроксиду натрію; 4. індикатор – 0,5-й спиртовий розчин крезолроту; 5. розчин ферменту (див. методику визначення амілолітичної активності).
Таблиця 5.1. Протеолітична активність

(перерахунок на повітряно-суху речовину)

0,1 н NaOH, мл, на 10 мл фільтрату	Одиниці протеолітичної активності, е	ПА при введенні 10 мл розчину при розбавленні
0,1 н NaOH, мл, на 10 мл фільтрату	Одиниці протеолітичної активності, е	1 : 100	1 : 50
1	2	3	4
0,30	0,0123	0,615	0,30
0,35	0,0167	0,835	0,418
0,40	0,0203	1,015	0,508
0,45	0,0243	1,215	0,608
0,50	0,0283	1,415	0,708
0,55	0,0320	1,600	0,800

Продовження табл.. 5.1.

1	2	3	4
0,60	0,0360	1,800	0,900
0,65	0,0393	1,965	0,982
0,70	0,0433	2,165	1,082
0,75	0,0473	2,365	1,182
0,80	0,0513	2,565	1,282
0,85	0,0550	2,750	1,375
0,90	0,0590	2,950	1,475
0,95	0,0627	3,135	1,573
1,00	0,0667	3,335	1,663
1,05	0,0700	3,500	1,750
1,10	0,0747	3,735	1,868
1,15	0,0787	3,935	1,968
1,20	0,0827	4,135	2,068
1,25	0,0867	4,335	2,168
1,30	0,0907	4,535	2,268
1,35	0,0950	4,750	2,375
1,40	0,0990	4,950	2,475
1,45	0,1033	5,165	2,582
1,50	0,1080	5,400	2,700
1,55	0,1123	5,616	2,808
1,60	0,1167	5,835	2,918
1,65	0,1213	6,065	3,032
1,70	0,1260	6,300	3,150
1,75	0,1307	6,535	3,266
1,80	0,1353	6,765	3,382
1,85	0,1400	7,000	3,500
1,90	0,1453	7,265	3,632
2,00	0,1500	7,500	3,750
2,05	0,1556	7,780	3,890
2,10	0,1603	8,015	4,008
2,15	0,1653	8,265	4,132
2,20	0,1707	8,035	4,268
2,25	0,1817	9,085	4,542
2,30	0,1873	9,365	4,632
2,35	0,1933	9,665	4,832
2,40	0,1993	9,965	4,982
2,45	0,2053	10,265	5,182
2,50	0,2113	10,565	5,232

5.7. Визначення активності каталази (за О.М.Бахом та О.І.Опаріним).

Представником ферментів, що каталізує відщеплення води, є каталаза, котра розкладає пероксид водню за рівнянням:

2H₂O₂  2H₂O + O₂

Пероксид водню утворюється при відновленні молекулярного кисню в окисно-відновних процесах живих організмів, і є для клітини отруйною речовиною.

Принцип методу грунтується на врахуванні зміни кількості пероксиду водню, який визначається титруванням перманганатом калію.

Реакція проходить за рівнянням:

2KMnO₄ + 3H₂O₂ + 4H₂SO₄  2KHSO₄ + 2MnSO₄ + 8H₂O + 5O₂

Про кількість пероксиду водню, що розкладається під дією ферменту, судять за різницею кількості (мл) 0,1 н. розчину KMnO₄, який витрачається на титрування в контрольному та робочому дослідах.

Хід роботи. Відбирають дві проби прозорого фільтрату або центрифугату по 20 мл кожна (дослідна та контрольна), останню кип'ятять протягом 5 хв на сітці для інактивації ферменту. До проб додають по 20 мл дистильованої води, по 3 мл 1%-го пероксиду водню, попередньо нейтралізованого 0,1 н. розчином NaOH, і залишають на 30 хв при кімнатній температурі. Потім до проб додають по 5 мл 10%-ї сірчаної кислоти, а пероксид водню, що залишився, титрують 0,1 н. розчином марганцевокислого калію. Про активність каталази судять за кількістю міліграмів пероксиду водню, яка руйнувалась протягом 30 хв ферментом, що міститься в 1 г досліджуваного матеріалу.

Активність каталази визначають за формулою:

де A – кількість 0,1 н. розчину KMnO₄, яка витрачається на титрування контролю, мл; B – кількість 0,1 н. розчину KMnO₄ яка витрачається на титрування робочого досліду, мл; 1,7 – 1 мл 0,1 н. розчину KMnO₄ еквівалентний 1,7 мг H₂O₂; n – наважка досліджуваного матеріалу в пробі, що титрується, г.

Реактиви: 1. 1,0-й розчин перекису водню; 2. 0,1 н. розчин марганцевокислого калію; 3. 10%-й розчин сірчаної кислоти; 4. Екстракт борошна чи іншого матеріалу: на аналітичних вагах зважують в мірну колбу місткістю 50 мл 2 г борошна чи іншого добре подрібненого рослинного матеріалу. В колбу приливають дистильовану воду, вміст її добре перемішують, додають 2–3 краплини толуолу, доводять водою до мітки, і суміш настоюють протягом 2 годин при кімнатній температурі. Потім рідину відфільтровують через сухий складчастий фільтр або центрифугують. У фільтраті або центрифугаті визначають каталазну активність.

1 2 3 4 5 6 7

Схожі:

Конспект заняття з біології на тему: «Будова, властивості, роль в життєдіяльності полісахаридів» Чим складні ліпіди відрізняються від простих? Наведіть приклади простих і складних ліпідів	З КОНТРОЛЮ ЯКОСТІ ЛІКАРСЬКИХ ЗАСОБІВ МІНІСТЕРСТВА ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ ЗАТ “Борщагівський хіміко-фармацевтичний завод, які не відповідають вимогам ФС 42У-4-586-99 за показниками “Ідентифікація” (негативна...
Розглянуто на засіданні циклової Затверджую Визначення інформації і інформатики. Властивості інформації. Одиниці вимірювання інформації	1. Технічне та програмне забезпечення ЕОМ Визначення інформації і інформатики. Властивості інформації. Одиниці вимірювання інформації
Тема Підсумкове заняття. Як визначити якісний продукт (споживча культура) У повсякденному харчуванні обов’язково мають бути: білки, жири, вуглеводи, вітаміни, мінеральні речовини, клітковина, вода	Що потрібно для організму? Роль харчування у житті людини. Білки, жири, вуглеводи. Вітаміни. Мінеральні речовини та мікроелементи. Вода. Практична робота: робота...
УРОК №1 Тема. Початкові поняття геометрії. Властивості точок і прямих Узагальнивши практичні знання і вміння учнів, сформулювати властивості приналежності точок і прямих та властивості взаємного розміщення...	Лабораторнаробота №1 ВИЗНАЧЕННЯ ХЛІБОПЕКАРСЬКИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ ПШЕНИЧНОГО... Мета роботи: засвоїти методики і визначити хлібопекарські властивості пшеничного борошна за кількістю і якістю клейковини, газоутворюючою...
УРОК №15 Тема. Узагальнення вивченого матеріалу з теми «Основні геометричні... Про означення, властивості суміжних та вертикальних кутів; а також про означення, ознаки та властивості паралельних прямих; повторити...	Василь КОЖЕЛЯНКО, Буковина України з від'ємного почав перетворюватися на додатній, тобто припинилося кількісне скорочення населення, мало того, воно почало...

Додайте кнопку на своєму сайті:
Портал навчання